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摘要:牛胚胎移植技术,已开始应用于牛的改良和品种引进中,是养牛业今后必须采用的一项新技术之一。bQr牛农宝

关键词:牛;胚胎移植;规程bQr牛农宝

中国分类号:S814.6 文献标识码:C 文章编号:1003-7950(2002)06-0044-02bQr牛农宝

牛的胚胎移植,在操作过程中技术要求高,通过我县牛胚胎移植技术的推广,现将牛胚胎移植技术操作规程介绍如下,供参考。bQr牛农宝

1 主题内容与适用范围bQr牛农宝

1.1 本规程规定了牛胚胎移植技术操作的基本原则、要求和方法。bQr牛农宝

1.2 本规程适用于牛胚胎移植技术推广应用的规范化操作。bQr牛农宝

1.3 本规程应用冻胚进行牛胚胎移植。bQr牛农宝

2 受体牛的选择标准bQr牛农宝

2.1 年龄在3~8岁,健康,无疾病,体格较大,膘度好。bQr牛农宝

2.2 繁殖性能正常,产后60d以上,并有两次以上的正常自然发情记录。bQr牛农宝

2.3 泌乳性能好,无难产史,不使用两次人工受精未孕的牛。bQr牛农宝

3 受体牛的饲养管理bQr牛农宝

3.1 做到精心管理,合理饲养,环境清洁,饲草、饲料、饮水要新鲜,补充食盐和必要的添加剂。bQr牛农宝

3.2 组成一定数量的牛群。圈舍内防止过挤,以便于发情观察。bQr牛农宝

3.3 农户长期舍饲的母牛要注意加强运动。bQr牛农宝

3.4 防止在移植前后因饲料及环境改善造成的应激反应。bQr牛农宝

4 受体牛的同期发情bQr牛农宝

4.1 使用前列腺素(PGF2α)一次肌注,诱导发情。给处于情期8~15d且直肠检查黄体的受体牛一次注射PGF2α。bQr牛农宝

4.2 两次PGF2α处理。在不考虑发情周期的情况下,可间隔11d,前后两次肌注PGF2α。bQr牛农宝

5 发情观察bQr牛农宝

原则上根据母牛接受爬跨确认为发情、早、晚各观察30min发清情况。对发情牛需做直肠检查,以确认卵泡,次日上午或晚上做直肠检查确定是否排政若在发情后36h以后排卵的牛不能用作受体牛。bQr牛农宝

6 冷冻胚胎的解冻bQr牛农宝

6.1 三步平衡法冻胚的解冻bQr牛农宝

6.1 解冻液的配备:将10%、6%和3%的PBS(培养液)保存液,用0.22/m滤器灭菌,分装在小培养皿内,第1杯为含10%的PBS保存液,第2杯为含6%的PBS保存液,第3杯为含3%的PBS保存液,第4杯为不含的PBS保存液。bQr牛农宝

6.1.2 胚胎的解冻:胚胎从液氮中取出在3s内投入38℃水浴浸10s。bQr牛农宝

6.1.3 三步脱:用70%酒精棉球消毒解冻后塑料吸管和剪刀刀刃,剪去棉塞端,与带有空气的1ml注射器连接上。再剪去吸管的另一端,在室温下将胚胎推入10%和0.3mol/L蔗糖PBS保存液中,放置5min,以后陆续移入6%和3%蔗糖的PBS保存液中,各放置5min,最后移至不含的PBS保存液中镜检待用。bQr牛农宝

6.2 一步吸管法解冻bQr牛农宝

6.2.1 解冻方法:从液氮中取出装有胚胎的塑料吸管,投入37~38℃温水中,水浴10s。bQr牛农宝

6.2.2 脱:手提塑料吸管、棉塞向下甩2~3次,将气泡甩向棉塞端,使蔗糖液和保存液混合。或者用手指轻弹气泡,使两种液体混合,将棉塞向下直立10min。bQr牛农宝

6.2.3 观察胚胎:用特制塑料吸管观察镜或显微镜的目镜,通过塑料管壁从上到下转动观察胚胎的形态和位置,确定后用70%酒精棉球消毒并切除吸管上层Icm,切口要平整,可直接用于移植。bQr牛农宝

7 胚胎的鉴定bQr牛农宝

7.1 在100~200倍实体解剖显微镜下观察受精卵的形态、色调、球的大小、均匀度、细胞的密度、与透明带的间隙以及变性情况等。bQr牛农宝

7.2 凡卵子的卵黄未形成球及细胞团的,均列为未受精卵。bQr牛农宝

7.3 胚胎的发育阶段:通常受精后6~8d非手术回收的正常受精卵发育情况如下。bQr牛农宝

7.3.1 桑椹胚一发情后第5~6d回收的卵,只能观察到球状的细胞团,分不清球,占据透明带内腔的大部分。bQr牛农宝

7.3.2 致密桑椹胚一发情后第6~7d回收的卵,细胞团变小,占透明带内腔60%~70%。bQr牛农宝

7.3.3 早期囊胚一发情后7~8d回收的卵,细胞的一部分出现发亮的胚泡腔。细胞团占透明带内腔70%~80%,难以分清内细胞团和滋养层。bQr牛农宝

7.3.4 囊胚一发情后第7~8d回收,内细胞团和滋养层界线清晰,胚泡胜明显,细胞充满透明带内脏。bQr牛农宝

7.3.5 扩大囊胚一发情后第8~9d回收,胚泡腔明显扩大,体积增大到原来的1.2~1.5倍,与透明带之间无空隙,透明带变薄,相当于正常厚度的1/3。bQr牛农宝

7.3.6 孵育胚—一般在发情后9~11d回收的受精卵,由于胚泡腔继续扩张,致使透明带破裂,卵细胞脱出。bQr牛农宝

7.3.7 凡在发情后6~8d回收的16细胞以下的受精卵均应列为非正常发育卵,不能用于移植。bQr牛农宝

8 胚胎分级bQr牛农宝

8.1 A级一胚胎形态完整,轮廓清晰,呈球形,球大小均匀,结构紧凑,色调和透明带适中,无附着的细胞和液泡。bQr牛农宝

8.2 B级一轮廓清晰,色调和细胞密度良好,可见到一些附着的细胞和液泡,变性细胞约占10%~30%。bQr牛农宝

8.3 C级一轮廓不清晰,色调发暗,结构较松散,游离的细胞或液泡较多,变性细胞达30%~50%。bQr牛农宝

8.4 胚胎的等级划分还应考虑到受精卵的发育程度。发情后第7~8d回收的受精卵在正常发育时应处于致密桑植胚至囊胚阶段。凡在16细胞以下的受精卵及变性细胞超过1/2的胚胎均属等外。bQr牛农宝

9 移植bQr牛农宝

9.1 待移植受体牛检查 要求受体牛发情时直肠检查的卵泡直径在10~20mm左右,发情后36h出现排卵。移植前直检黄体,其直径在11~15mm以上,黄体的手感性好,质地软而充实。bQr牛农宝

9.2 受体牛的准备 将受体牛保定,清除粪便,肌注2%静松灵1ml或用2%的普鲁卡因3ml在l~2尾椎间硬膜外。清洗外阴,用高锰酸钾水冲洗消毒,用灭菌纸擦干,最后经酒精棉球消毒。bQr牛农宝

9.3 器械准备 仿西德式金属移植器,先将移植枪、抢头及金属保护外套分别用纸包扎好,高压消毒。塑料卡苏式移植枪需经气体灭菌。移植时先用70%酒精棉球消毒装有胚胎的塑料吸管,然后剪掉封口一端,装入移植枪内,套上保护外套。bQr牛农宝

9.4 移植前胚胎装管 胚胎移植时可用0.25ml吸管分三段吸入PBS保存液,中间由两个气泡隔开,中段含有胚胎。也可用小汽泡分成多段装管,胚胎在中段。一步吸管法解冻脱后,用酒精棉球多次消毒吸管,剪去封口即可用于移植。bQr牛农宝

9.5 移植 术者用左手扒开外阴,右手持移植器插入,然后左手伸进直肠,移植器到达子宫颈口时,右手用力将移植枪捅破外套填片,插入子宫颈。左手在直肠内诱导使枪头轻轻稳妥地插入黄体例子宫角至大弯处,持移植器的右手推出胚胎,缓慢旋转地抽出移植枪。bQr牛农宝

10 妊娠诊断bQr牛农宝

10.1 直肠检查法 通常在移植后3个月开始检查。妊娠90d时,子宫继续增大,落入腹腔,可感觉到胎儿的浮动,孕角出现孕脉,子宫壁可触到子叶。bQr牛农宝

10.2 诊断(B超)对妊娠25d以上的受体牛可用B超检查。bQr牛农宝

作者 admin